MC1-R CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421583

概要

Mc1r はメラノコルチン1受容体（MC1-R）をコードしており、MC1-R は G タンパク質共役型受容体（GPCR）の一種で、メラノサイトに高発現し、Gs と共役して cAMP/PKA シグナルを活性化することで色素形成を制御します。MC1-R の活性化は、CREB やメラニン合成酵素などの下流エフェクターを介して、ユーメラニンとフェオメラニンの合成バランスに影響を与え、α-MSH などのホルモン性シグナルやアグーチシグナルタンパク質による拮抗作用といった情報を統合します。マウスモデルでは、Mc1r 活性の変化が被毛色の表現型を調節し、さらに色素細胞における酸化ストレス応答や UV 誘発損傷の処理を制御する経路とも関わります。メラノコルチンシグナルは MAPK 経路やメラノサイト分化を司る転写プログラムとも接続しているため、Mc1r の攪乱は、色素細胞生物学、炎症関連シグナルのクロストーク、皮膚科学研究における遺伝子型—表現型対応の解析に有用です。

MC1-R CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMc1r遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mc1r内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mc1rのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MC1-Rタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MC1-Rシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mc1r欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MC1-Rの機能に不可欠なMc1rエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mc1rゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MC1-R CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMC1-R CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mc1r遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MC1-R HDRプラスミド（m）および MC1-R HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMc1rホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMc1r標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。