MBOAT5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403597-ACT

LPCAT3 (também conhecido como MBOAT5) codifica uma O-aciltransferase associada à membrana que remodela fosfolipídios por meio do ciclo de Lands, catalisando a transferência de cadeias acila para a lisofosfatidilcolina para ajudar a manter a composição de membrana e a disponibilidade de lipídios de sinalização. Ao modular os reservatórios de fosfolipídios poli-insaturados, o MBOAT5 influencia processos dependentes de membrana, incluindo tráfego vesicular, sinalização de receptores e respostas ao estresse oxidativo ligadas à sensibilidade à peroxidação lipídica. Alterações na remodelação de fosfolipídios têm sido associadas a fenótipos metabólicos e inflamatórios, tornando o MBOAT5 um ponto relevante para estudar a homeostase lipídica e programas de adaptação ao estresse. A investigação funcional dessa via é comumente aplicada a modelos de disfunção hepática e cardiometabólica, ativação imune e transições de estado celular impulsionadas por lipídios.

MBOAT5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LPCAT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MBOAT5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LPCAT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LPCAT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MBOAT5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LPCAT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MBOAT5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MBOAT5 em células tumorais com expressão de LPCAT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.