MBD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421578

概要

Mbd3 は、メチル化 CpG 結合ドメインタンパク質 3（MBD3）をコードしており、ATP 依存的なクロマチンリモデリングとヒストン脱アセチル化を統合して転写プログラムを制御する NuRD（ヌクレオソームリモデリング／脱アセチル化）複合体の中核サブユニットです。マウス細胞では、MBD3 はプロモーターおよびエンハンサーのアクセス性を協調的に制御することで、系譜決定、多能性の移行、ならびに複製と連動したクロマチン組織化のエピジェネティック制御に寄与します。NuRD 依存的な抑制と発生関連遺伝子ネットワークの微調整を通じて、MBD3 は細胞運命決定とゲノム安定性に影響を及ぼします。MBD3/NuRD 活性の破綻は、分化状態の変化や転写制御異常と関連づけられており、発生表現型やがんに伴うエピジェネティック・リモデリングに関わることが示唆されています。

MBD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMbd3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mbd3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mbd3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MBD3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MBD3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mbd3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MBD3の機能に不可欠なMbd3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mbd3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MBD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMBD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mbd3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MBD3 HDRプラスミド（m）および MBD3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMbd3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMbd3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。