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MATH-5慢病毒激活颗粒(h) | sc-415110-LAC | 200 µl | $455.00 |
ATOH7 编码碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子 MATH-5,是人类眼发育过程中神经发生能力及视网膜神经节细胞谱系特化的关键调控因子。MATH-5 将促神经(proneural)转录程序与 Notch 及其他发育信号输入整合起来,协调细胞周期退出与神经元分化。ATOH7 活性失调与视神经形成异常以及对视神经病变的易感性相关,因此在视网膜发育与视觉系统疾病研究中具有重要意义。由于其作用位于多种神经元命运决定因子上游,ATOH7 常被用于探究控制神经发生和视网膜细胞身份的基因调控网络。
MATH-5 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 ATOH7 表达。
MATH-5 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在ATOH7转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性MATH-5表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 ATOH7 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。