Mast Cell Tryptase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400887

Visão geral

TPSAB1 codifica a triptase de mastócitos, uma protease serina secretada que é armazenada em grânulos citoplasmáticos e liberada durante a desgranulação dos mastócitos. A triptase de mastócitos contribui para a remodelação proteolítica da matriz extracelular, a modulação da sinalização de citocinas e quimiocinas e a ativação de receptores ativados por proteases, moldando programas de inflamação e reparo tecidual. Sua atividade está ligada a processos mediados por mastócitos, como permeabilidade vascular, recrutamento de leucócitos e reatividade das vias aéreas, com relevância para a inflamação alérgica e outros distúrbios imunomediados. Como protease associada a grânulos, a triptase de mastócitos também é usada como marcador molecular para estudar a abundância de mastócitos, seu estado de ativação e suas funções efetoras em tecidos humanos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Mast Cell Tryptase (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TPSAB1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TPSAB1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TPSAB1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Mast Cell Tryptase.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TPSAB1 para a investigação da sinalização de Mast Cell Tryptase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TPSAB1 críticos para a função Mast Cell Tryptase
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TPSAB1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Mast Cell Tryptase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Mast Cell Tryptase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TPSAB1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Mast Cell Tryptase Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Mast Cell Tryptase (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TPSAB1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TPSAB1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.