Mast Cell Tryptase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400887

概要

TPSAB1は、肥満細胞トリプターゼ（マスト細胞トリプターゼ）をコードしており、これは細胞質内の顆粒に貯蔵され、肥満細胞の脱顆粒時に放出される分泌性セリンプロテアーゼです。肥満細胞トリプターゼは、細胞外マトリックスのタンパク質分解を介したリモデリング、サイトカイン／ケモカインシグナルの調節、プロテアーゼ活性化受容体（PAR）の活性化に寄与し、炎症および組織修復プログラムを形成します。その活性は、血管透過性の亢進、白血球のリクルート、気道反応性といった肥満細胞主導のプロセスと関連しており、アレルギー性炎症をはじめとする免疫介在性疾患との関連が示されています。顆粒関連プロテアーゼとして、肥満細胞トリプターゼは、ヒト組織における肥満細胞の存在量、活性化状態、エフェクター機能を解析するための分子マーカーとしても用いられます。

Mast Cell Tryptase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTPSAB1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TPSAB1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TPSAB1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Mast Cell Tryptaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Mast Cell Tryptaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TPSAB1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Mast Cell Tryptaseの機能に不可欠なTPSAB1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TPSAB1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Mast Cell Tryptase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMast Cell Tryptase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TPSAB1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Mast Cell Tryptase HDRプラスミド（h）および Mast Cell Tryptase HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTPSAB1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTPSAB1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。