Mast Cell Protease 5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421601

Descripción general

Cma1 codifica la proteasa 5 de los mastocitos de ratón, una serinproteasa de la familia de las quimasas almacenada en los gránulos secretores de los mastocitos de tipo conectivo y liberada tras la desgranulación inducida por FcεRI. La proteasa 5 de los mastocitos participa en la remodelación de la matriz extracelular y en la regulación de mediadores vasoactivos y proinflamatorios mediante el procesamiento proteolítico de péptidos y sustratos relacionados con citocinas, modulando así el reclutamiento de leucocitos y las respuestas tisulares. A través de estas actividades, contribuye a vías implicadas en la inflamación alérgica, la hiperreactividad de las vías respiratorias y la fibrosis tisular, y se estudia con frecuencia en modelos de inflamación cutánea y de remodelado cardiopulmonar. La alteración de la actividad de la proteasa 5 de los mastocitos se ha vinculado a cambios en la comunicación entre la inmunidad innata y adaptativa y en la homeostasis de los tejidos de barrera en contextos de enfermedad inflamatoria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Mast Cell Protease 5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cma1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cma1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cma1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Mast Cell Protease 5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cma1 para la investigación de la señalización de Mast Cell Protease 5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cma1 críticos para la función de Mast Cell Protease 5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cma1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Mast Cell Protease 5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Mast Cell Protease 5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cma1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Mast Cell Protease 5 (m) y el plásmido HDR Mast Cell Protease 5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cma1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cma1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.