Mast Cell Chymase Plasmide Double Nickase (h): sc-403686-NIC

CMA1 codifica la chimasi dei mastociti, una proteasi serinica associata ai granuli e rilasciata durante la degranulazione mastocitaria, che modella le risposte infiammatorie e di rimodellamento tissutale. Nell’uomo, la chimasi contribuisce al turnover della matrice extracellulare e alla segnalazione locale processando diversi substrati, tra cui peptidi vasoattivi e precursori di citochine, influenzando così le vie dei recettori attivati da proteasi e quelle correlate al sistema renina–angiotensina nel microambiente perivascolare. Un’attività della chimasi deregolata è stata associata all’infiammazione allergica e a processi cronici di rimodellamento fibrotico, in cui le proteasi derivate dai mastociti modulano il reclutamento leucocitario, la permeabilità vascolare e l’attivazione delle cellule stromali. Di conseguenza, CMA1 è spesso studiato nella biologia delle vie aeree e cardiovascolare, nelle reti di segnalazione fibro-infiammatorie e nei meccanismi di patologia guidata dai mastociti.

Mast Cell Chymase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CMA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CMA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CMA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CMA1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.