MARCH9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410240-ACT

MARCH9は、エンドソームおよびリソソーム膜に局在する膜結合型のRING-CH E3ユビキチンリガーゼをコードしており、ユビキチン依存的なソーティングを介してタンパク質の分解回転と輸送を制御します。特定の膜タンパク質をユビキチン化することで、MARCH9はエンドサイトーシスによるリサイクリング、リソソームへの標的化、さらに広範なプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の制御に寄与し、小胞動態や免疫に関連する細胞表面受容体の可用性を制御する経路とも交差します。ユビキチンリガーゼや膜輸送の制御異常は、多様な疾患状況で観察されるシグナル伝達の破綻やストレス応答の異常と関連づけられており、MARCH9をユビキチン介在性の細胞恒常性制御を探るための結節点として用いることが支持されます。MARCH9の発現と活性を研究することで、小胞輸送をシグナル出力や細胞状態の変化へと結びつける機構を明らかにできます。

MARCH9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MARCH9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MARCH9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MARCH9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMARCH9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MARCH9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMARCH9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMARCH9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMARCH9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMARCH9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。