MAO-B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401732-ACT

MAOB codifica a monoamina oxidase B (MAO‑B), uma enzima dependente de flavina localizada na membrana externa mitocondrial que catalisa a desaminação oxidativa de aminas de origem endógena e alimentar. Ao regular o catabolismo da dopamina, da fenetilamina e de outras monoaminas relacionadas, a MAO‑B influencia a homeostase de neurotransmissores e gera peróxido de hidrogênio como subproduto, relacionando sua atividade ao equilíbrio redox mitocondrial e a vias de estresse oxidativo. A função da MAO‑B se cruza com a sinalização monoaminérgica, o metabolismo mitocondrial e respostas celulares ao estresse em tecidos neurais e periféricos. Alterações na expressão de MAOB ou na atividade da MAO‑B têm sido associadas à biologia de doenças neurodegenerativas e neuropsiquiátricas, bem como a fenótipos moleculares ligados à inflamação e ao envelhecimento, apoiando estudos mecanísticos do turnover de monoaminas e de processos dependentes de EROs (espécies reativas de oxigênio).

MAO-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAOB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAO-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAOB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAOB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAO-B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAOB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAO-B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAO-B em células tumorais com expressão de MAOB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.