MAO-A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401030-ACT

MAOA codifica a monoamina oxidase A (MAO-A) da membrana externa mitocondrial, uma enzima contendo flavina que catalisa a desaminação oxidativa de aminas biogênicas como serotonina, norepinefrina e dopamina. Ao regular o turnover de monoaminas e gerar subprodutos metabólicos, incluindo peróxido de hidrogênio, a MAO-A conecta a homeostase de neurotransmissores ao equilíbrio redox e às respostas mitocondriais ao estresse. A atividade de MAOA influencia a sinalização sináptica, a regulação neuroendócrina e vias associadas à inflamação, tornando-o um alvo amplamente estudado em pesquisas de neuropsiquiatria e neurodegeneração. A expressão ou função desregulada de MAOA tem sido associada a alterações no tônus monoaminérgico e a fenótipos comportamentais, dando suporte a estudos mecanísticos em modelos celulares neuronais e periféricos.

MAO-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAOA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAO-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAOA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAOA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAO-A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAOA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAO-A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAO-A em células tumorais com expressão de MAOA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.