MAN2C1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404066-NIC

MAN2C1は、細胞質α-マンノシダーゼ2C1をコードする遺伝子であり、この酵素は、糖タンパク質の品質管理や誤折りたたみタンパク質の除去過程で生じる遊離オリゴ糖をトリミングするエキソグリコシダーゼです。MAN2C1はリソソーム外で高マンノース型N-グリカン断片を処理することで、糖質分解に寄与し、ER関連分解（ERAD）に由来する脱グリコシル化グリカンの細胞内負荷の調節にも関与します。MAN2C1活性の変化はプロテオスタシスやグリカン依存性のシグナル伝達ネットワークに影響し得るため、本酵素は細胞ストレス応答や代謝恒常性を制御する経路との関連が示唆されます。糖鎖付加と遊離オリゴ糖代謝の破綻はヒト疾患の文脈でしばしば観察されており、糖タンパク質プロセシングの機構解析においてMAN2C1の改変が有用であることを支持しています。

MAN2C1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MAN2C1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MAN2C1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MAN2C1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MAN2C1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。