Plásmido Doble Nickase (h) MAN2C1: sc-404066-NIC

MAN2C1 codifica la alfa-manosidasa citosólica 2C1, una exoglicosidasa que recorta oligosacáridos libres generados durante el control de calidad de las glucoproteínas y la eliminación de proteínas mal plegadas. Al procesar fragmentos de N-glicanos ricos en manosa fuera del lisosoma, MAN2C1 contribuye al catabolismo de carbohidratos y ayuda a regular la carga celular de glicanos desglucosilados derivados de la degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD). La alteración de la actividad de MAN2C1 puede influir en la proteostasis y en redes de señalización dependientes de glicanos, vinculando esta enzima con vías que modulan las respuestas al estrés celular y la homeostasis metabólica. La desregulación de la glicosilación y del recambio de oligosacáridos libres se observa con frecuencia en contextos de enfermedad humana, lo que respalda el uso de la perturbación de MAN2C1 en estudios mecanísticos del procesamiento de glucoproteínas.

MAN2C1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MAN2C1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MAN2C1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MAN2C1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MAN2C1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.