MALL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406302

Panoramica

MAL-like (MALL) codifica una proteina di membrana tetraspan arricchita in microdomini di membrana ricchi di colesterolo e sfingolipidi, dove contribuisce a organizzare il traffico apicale e la compartimentalizzazione della membrana nelle cellule epiteliali. Attraverso effetti sull’architettura dei lipid raft, MALL può influenzare il riciclo endocitico, il trasporto vescicolare e la distribuzione spaziale dei complessi di segnalazione sulla membrana plasmatica. Un’alterata espressione di MALL è stata osservata in molteplici tipi di tumore ed è studiata in relazione allo stato di differenziazione epiteliale, alla polarità cellulare e al comportamento della segnalazione dipendente dai microdomini. Queste proprietà rendono MALL rilevante per indagare i meccanismi di organizzazione della membrana che modulano proliferazione, adesione e dinamica dei recettori in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MALL (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MALL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MALL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MALL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MALL.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MALL per lo studio della segnalazione di MALL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MALL critici per la funzione di MALL
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MALL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MALL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MALL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MALL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MALL Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MALL (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MALL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MALL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.