MafG Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421533-ACT

Mafg codifica MafG, um fator de transcrição small Maf do tipo basic leucine zipper (bZIP) que forma heterodímeros com proteínas CNC, como NFE2L2/NRF2, para regular a expressão gênica dependente do elemento de resposta antioxidante (ARE). Em células de camundongo, MafG contribui para a homeostase redox, o metabolismo de xenobióticos e a adaptação celular ao estresse oxidativo e eletrofílico, moldando programas transcricionais ligados ao metabolismo da glutationa e a enzimas de desintoxicação. MafG também influencia a biologia de células hematopoéticas e imunes por meio do controle transcricional de genes de linhagem e de resposta ao estresse. A desregulação da atividade do eixo small Maf/NRF2 está associada a alterações na sinalização de estresse oxidativo e a estados inflamatórios, tornando Mafg um nó útil para estudos mecanísticos de vias de resposta ao estresse.

MafG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mafg sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MafG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mafg em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mafg, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MafG. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mafg nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MafG no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MafG em células tumorais com expressão de Mafg silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.