MafA CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401480

概要

MAFAはMafA転写因子をコードしており、MafAはMAF認識配列に結合して、細胞分化や刺激応答性の転写に関わる遺伝子発現プログラムを制御する塩基性ロイシンジッパー型タンパク質である。ヒト膵島の生物学においてMafAは、インスリン遺伝子転写の制御に加え、グルコース応答性シグナル伝達、分泌経路機能、内分泌細胞アイデンティティの維持を協調させるより広範なネットワークの調節と関連づけられている。MAFA活性の変化は、β細胞における遺伝子発現状態の破綻やインスリン産生低下と関連して報告されており、糖尿病関連機序や膵島ストレス応答の研究において重要である。膵臓以外でも、MafA依存的な転写制御は、組織特異的エンハンサー利用や転写因子主導の代謝遺伝子制御を検討するためのモデルとなる。

MafA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMAFA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MAFA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MAFAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MafAタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MafAシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MAFA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MafAの機能に不可欠なMAFAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MAFAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MafA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMafA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MAFA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MafA HDRプラスミド（h）および MafA HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMAFAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMAFA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。