MACF1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402923-ACT

MACF1（microtubule actin crosslinking factor 1）は、大型の細胞骨格タンパク質であるスペクトラプラキンの一種で、微小管とアクチンの相互作用を協調させることにより、細胞極性、細胞内輸送、指向性移動を制御します。皮質における微小管プラス端のダイナミクスを組織化し、細胞骨格ネットワーク同士を連結することで、MACF1は神経突起伸長、上皮組織の構築、創傷に伴う運動性などの過程に寄与します。機能解析から、MACF1はWnt/β-カテニンシグナル伝達と細胞骨格リモデリングおよび接着動態を統合する経路に位置づけられており、組織形態形成やメカノトランスダクションに影響を及ぼします。MACF1の機能異常や遺伝的変異は、神経発達および神経精神疾患様の表現型と関連することが示されており、また細胞骨格の組織化の変化が浸潤性の細胞挙動を支える状況においても検討されています。

MACF1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MACF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MACF1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MACF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMACF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MACF1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMACF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMACF1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMACF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMACF1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。