LYPLA3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409535

概要

PLA2G15はLYPLA3（リソソーム局在性のホスホリパーゼ／脱アシル化酵素）をコードしており、脂肪酸アシル鎖の加水分解を介したリン脂質の代謝回転や膜脂質リモデリングに関与します。リソソームでの脂質分解に寄与することで、LYPLA3はエンドリソソーム輸送、オートファジーに連動した分解、細胞内脂質恒常性を制御する経路と交差します。リソソームの脂質処理の破綻は代謝ストレス応答と広く関連し、炎症シグナルやオルガネラ機能にも影響し得るため、LYPLA3はヒト細胞における脂質駆動性の攪乱を研究するうえで有用な結節点となります。LYPLA3の機能解析は、疾患関連の細胞状態でしばしば変化する脂質代謝やリソソーム中心のプロセスの機序研究を支えます。

LYPLA3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPLA2G15遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PLA2G15内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PLA2G15のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LYPLA3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LYPLA3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PLA2G15欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LYPLA3の機能に不可欠なPLA2G15エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PLA2G15ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LYPLA3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLYPLA3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PLA2G15遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LYPLA3 HDRプラスミド（h）および LYPLA3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPLA2G15ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPLA2G15標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。