Plásmido CRISPR de Activación (h) Ly-6K: sc-404264-ACT

El gen humano **LY6K** codifica **Ly-6K**, una proteína de superficie de la familia Ly6/uPAR anclada a **glicosilfosfatidilinositol (GPI)**, implicada en la señalización célula–célula y en la organización de microdominios de membrana. La expresión de Ly-6K se ha vinculado con la regulación del comportamiento de las células epiteliales, incluyendo la migración y los fenotipos invasivos, y se estudia con frecuencia en el contexto de programas génicos asociados a tumores e interacciones del microambiente relacionadas con el sistema inmunitario. Como molécula de superficie celular, Ly-6K es relevante para vías que gobiernan la adhesión, el crosstalk entre receptores y la remodelación de redes de señalización que influyen en la proliferación y la supervivencia. Su perfil de expresión restringido en muchos tejidos normales y su expresión elevada en múltiples tipos de cáncer hacen de **LY6K** un marcador útil y un nodo funcional para la oncología mecanística y la investigación de biomarcadores.

Ly-6K El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LY6K sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ly-6K El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LY6K en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LY6K, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ly-6K. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LY6K y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ly-6K en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ly-6K en células tumorales con expresión de LY6K silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.