Ly-6D Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-407742-NIC

LY6D codifica a Ly-6D, uma proteína de superfície celular ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) da superfamília Ly6/uPAR, implicada na especificação de linhagens epiteliais e em fenótipos celulares associados ao sistema imune. A Ly-6D participa de programas de interação célula–célula e pode influenciar redes de sinalização ligadas à diferenciação, à adesão e à organização de microdomínios de membrana. A expressão desregulada de LY6D tem sido relatada em múltiplos contextos tumorais e é frequentemente avaliada como um marcador de estados epiteliais ou restritos a determinadas linhagens, tornando-a relevante para estudos de heterogeneidade tumoral e transições de estado celular. Além disso, a biologia de LY6D é de interesse para investigar como proteínas ancoradas por GPI modulam a proximidade de receptores e a responsividade de vias downstream na membrana plasmática.

Ly-6D O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus LY6D em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de LY6D. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função LY6D. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com LY6D interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.