Plasmide Double Nickase (h) Ly-6D: sc-407742-NIC

LY6D code pour Ly-6D, une protéine de surface cellulaire ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI) appartenant à la superfamille Ly6/uPAR, impliquée dans la spécification des lignages épithéliaux et dans des phénotypes cellulaires associés à l’immunité. Ly-6D participe à des programmes d’interaction cellule–cellule et peut influencer des réseaux de signalisation liés à la différenciation, à l’adhésion et à l’organisation des microdomaines membranaires. Une expression dérégulée de LY6D a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et est fréquemment évaluée comme marqueur d’états épithéliaux ou restreints à un lignage, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’hétérogénéité tumorale et des transitions d’état cellulaire. Par ailleurs, la biologie de LY6D présente un intérêt pour comprendre comment les protéines ancrées GPI modulent la proximité des récepteurs et la réactivité des voies de signalisation en aval au niveau de la membrane plasmique.

Ly-6D Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LY6D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LY6D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LY6D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LY6D.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.