LTA4H Plasmide Double Nickase (h): sc-404695-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LTA4H Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LTA4H Double Nickase Plasmid (h) e il LTA4H Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LTA4H. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LTA4H Antibody (D-6): sc-390567
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LTA4H Plasmide Double Nickase (h) | sc-404695-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LTA4H Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404695-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’LTA4H (leucotriene A4 idrolasi) umano è un metalloenzima bifunzionale dipendente dallo zinco che converte il leucotriene A4 in leucotriene B4, un potente mediatore lipidico che amplifica la chemiotassi, la segnalazione citochinica e l’attivazione dell’immunità innata. Attraverso la via biosintetica dell’acido arachidonico e dei leucotrieni, LTA4H modella il reclutamento delle cellule infiammatorie e contribuisce all’equilibrio tra risposte pro-risolutive e pro-infiammatorie. Un’attività deregolata di LTA4H e la segnalazione di LTB4 sono state implicate in condizioni infiammatorie croniche e nel danno tissutale mediato dal sistema immunitario, e vengono frequentemente studiate nel contesto dell’infiammazione polmonare, cardiovascolare e metabolica. In quanto enzima citosolico con effetti ampi sul comportamento dei leucociti, LTA4H rappresenta un nodo utile per analizzare le reti di segnalazione guidate dagli eicosanoidi e i fenotipi legati all’infiammazione in modelli cellulari umani.
LTA4H Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LTA4H nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LTA4H. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LTA4H. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LTA4H interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.