LRRK2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426167

概要

Lrrk2は、GTPase活性を有し、エンドメンブレン区画におけるシグナル伝達を統合する多ドメインのセリン／スレオニンキナーゼであるロイシンリッチリピートキナーゼ2（LRRK2）をコードする。マウス細胞では、LRRK2はRab GTPaseのリン酸化を介して小胞輸送およびエンドリソソーム恒常性を調節し、オートファジー、細胞骨格ダイナミクス、ならびにオルガネラ輸送に影響を与える。Lrrk2の機能は骨髄系細胞系譜における自然免疫・炎症シグナルとも交差し、細胞ストレスに対する応答を形作る。LRRK2関連経路の破綻は神経変性、とりわけパーキンソン病に関連する機序に加え、リソソーム機能異常や神経炎症のモデルにおいても広く研究されている。

LRRK2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLrrk2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lrrk2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lrrk2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LRRK2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LRRK2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lrrk2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LRRK2の機能に不可欠なLrrk2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lrrk2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LRRK2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLRRK2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lrrk2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LRRK2 HDRプラスミド（m）および LRRK2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLrrk2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLrrk2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。