LOXL2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401021-NIC

LOXL2（lysyl oxidase like 2）は、分泌型の銅依存性アミン酸化酵素をコードしており、コラーゲンおよびエラスチン中のリシン残基の酸化的脱アミノ化を触媒することで、細胞外マトリックス（ECM）の架橋形成と組織リモデリングを促進します。マトリックス成熟にとどまらず、LOXL2はマトリックスの硬さやインテグリン依存性シグナル伝達を形成することにより、細胞接着、遊走、メカノトランスダクションにも影響を与え、上皮間葉転換（EMT）プログラムや低酸素応答ネットワークとの関連も報告されています。LOXL2の発現や活性の破綻は、線維化リモデリングや腫瘍微小環境のダイナミクスと関連しており、ヒト細胞系におけるECM生物学、間質—上皮クロストーク、ならびに浸潤関連表現型を研究するための有用な結節点となります。

LOXL2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LOXL2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LOXL2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LOXL2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LOXL2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。