LOK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423191

概要

Stk10 は、マウスにおいてリンパ球指向性キナーゼ（LOK）をコードする遺伝子であり、STE20 ファミリーに属するセリン／スレオニンキナーゼです。LOK は上流のシグナル伝達を細胞骨格の再構築および免疫細胞の挙動に結び付けます。LOK はアクチン動態、細胞極性、接着を制御する経路に関与し、リンパ球の遊走、免疫シナプスの構築、活性化シグナルへの応答性といったプロセスに影響します。造血系の文脈では、STK10/LOK シグナルの変化が免疫恒常性の破綻や細胞運動性の異常な表現型と関連づけられており、炎症に関連する生物学の研究において重要です。さらに、LOK の機能は、増殖や生存プログラムを形作るキナーゼ制御のチェックポイントとも交差しており、正常および疾患関連の細胞状態におけるシグナルネットワークの機構研究を後押しします。

LOK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるStk10遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Stk10内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Stk10のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LOKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LOKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Stk10欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LOKの機能に不可欠なStk10エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Stk10ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LOK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLOK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Stk10遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LOK HDRプラスミド（m）および LOK HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはStk10ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のStk10標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。