LOH12CR1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-426735-KO-2

Descripción general

Borcs5 codifica LOH12CR1, un componente del BORC (complejo relacionado con BLOC-1) que favorece el posicionamiento periférico de los lisosomas y de los orgánulos relacionados con lisosomas al acoplarlos al transporte basado en microtúbulos. A través de esta función, LOH12CR1 contribuye al tráfico endolisosomal, al control espacial de la capacidad degradativa y a procesos como la autofagia y el recambio de proteínas de membrana, que dependen de la distribución de los lisosomas. La dispersión de lisosomas dependiente de BORC se integra con vías mediadas por pequeñas GTPasas y por quinesinas que coordinan la motilidad de los orgánulos y la homeostasis celular. La desregulación del posicionamiento y el tráfico lisosomal es ampliamente relevante para la neurobiología y para modelos experimentales de neurodegeneración e inflamación, en los que la alteración del flujo autofágico y del transporte de orgánulos son fenotipos frecuentes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LOH12CR1 (m2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Borcs5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Borcs5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Borcs5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LOH12CR1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Borcs5 para la investigación de la señalización de LOH12CR1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Borcs5 críticos para la función de LOH12CR1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Borcs5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LOH12CR1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido LOH12CR1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Borcs5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LOH12CR1 (m) y el plásmido HDR LOH12CR1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Borcs5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Borcs5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.