LLH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422311

概要

Plod1はリシルヒドロキシラーゼ1（LLH1）をコードしており、LLH1は小胞体に局在する酵素で、プロコラーゲン中の特定のリジン残基を水酸化します。これにより、その後の糖鎖付加（グリコシル化）が可能となり、コラーゲンの架橋結合が安定化します。LLH1はコラーゲン成熟と細胞外マトリックス（ECM）構築の制御を通じて、結合組織の完全性、基底膜構造、ならびに組織リモデリング経路に影響を与えます。Plod1活性の攪乱は、異常なコラーゲン線維形成やマトリックスの力学特性の変化と関連しており、これらはマウスモデルにおける線維化の生物学、血管および皮膚の脆弱性表現型、腫瘍微小環境研究に関係するプロセスです。そのためPlod1は、ECM駆動型シグナル伝達、細胞—マトリックス相互作用、メカノトランスダクションの文脈で広く研究されています。

LLH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPlod1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Plod1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Plod1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LLH1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LLH1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Plod1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LLH1の機能に不可欠なPlod1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Plod1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LLH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLLH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Plod1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LLH1 HDRプラスミド（m）および LLH1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPlod1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPlod1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。