LKB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423192-ACT

O gene murino Stk11 codifica a quinase de serina/treonina LKB1, um regulador central da homeostase energética celular que fosforila e ativa quinases da família AMPK. Por meio da AMPK e de vias relacionadas, a LKB1 coordena respostas ao estresse metabólico, a função mitocondrial, a autofagia, a polaridade celular e o controle do ciclo celular, integrando a detecção de nutrientes à regulação do crescimento via sinalização de mTOR. A interrupção ou desregulação da sinalização de LKB1 está amplamente associada a metabolismo alterado e perda de polaridade em contextos relevantes para doenças, tornando o Stk11 um nó-chave para o estudo da adaptação ao estresse e da homeostase tecidual. Em modelos murinos, a modulação de Stk11/LKB1 permite a investigação mecanística da reprogramação metabólica e do crosstalk de sinalização em diversos tipos celulares.

LKB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Stk11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LKB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Stk11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Stk11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LKB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Stk11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LKB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LKB1 em células tumorais com expressão de Stk11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.