Lingo-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-414778-ACT

LINGO2 umano codifica Lingo-2, una proteina a singolo passaggio transmembrana con ripetizioni ricche in leucina e un dominio di tipo Ig, implicata nella regolazione della segnalazione cellula–cellula a livello della membrana plasmatica. Lingo-2 è stata studiata nel contesto dello sviluppo neurale e dei processi sinaptici, in cui le proteine della famiglia LINGO possono influenzare la guida assonale, la crescita dei neuriti e l’assemblaggio di complessi recettoriali. Un’espressione alterata di LINGO2 è stata associata, in studi genetici e trascrittomici, a tratti e disturbi neurologici, a sostegno della sua rilevanza per l’indagine dei programmi di segnalazione che modellano la connettività neuronale e la differenziazione cellulare. In quanto modulatore associato alla membrana, Lingo-2 rappresenta un punto di accesso pratico per esplorare cambiamenti a livello di via di segnalazione tramite risposte trascrizionali a valle e readout di fosfo-segnalazione.

Lingo-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LINGO2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Lingo-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LINGO2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LINGO2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Lingo-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LINGO2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Lingo-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Lingo-2 nelle cellule tumorali con espressione di LINGO2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.