Plasmide CRISPR d'Activation (h) LIN-28: sc-401164-ACT

LIN28A humain code LIN-28, une protéine de liaison à l’ARN conservée au cours de l’évolution, qui régule l’expression génique post‑transcriptionnelle en modulant la stabilité et la traduction des ARNm et en bloquant de manière sélective la maturation des microARN de la famille let‑7. Par l’intermédiaire de l’axe LIN28/let‑7, LIN‑28 influence le calendrier du développement, le maintien d’états de type « souche » et la reprogrammation métabolique, avec des effets en aval sur les programmes de croissance et de différenciation. L’activité de LIN28A recoupe les voies de biogenèse des miARN et des réseaux de signalisation qui orientent les décisions de destinée cellulaire, notamment dans des contextes liés à la prolifération et à la pluripotence. Une dérégulation de la régulation LIN28A/let‑7 a été associée à la biologie tumorale et à des états de différenciation altérés, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des réseaux oncogéniques et de la régulation des gènes du développement.

LIN-28 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LIN28A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LIN-28 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LIN28A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LIN28A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LIN-28. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LIN28A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LIN-28 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LIN-28 dans les cellules tumorales présentant une expression de LIN28A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.