LIFR Double Nickaseプラスミド (h): sc-400861-NIC

白血病抑制因子受容体（LIFR）はI型サイトカイン受容体であり、gp130と複合体を形成して、LIFおよび関連するIL-6ファミリーサイトカインによるシグナル伝達を仲介します。リガンド結合によりJAK/STAT、MAPK/ERK、PI3K/AKT経路の活性化が促進され、分化、生存、組織恒常性などの細胞運命決定を制御する転写プログラムが協調的に制御されます。LIFR依存的シグナルは発生生物学や幹細胞研究の文脈で解析されており、受容体機能や発現の変化は、複数の疾患状況における増殖制御の破綻や炎症性シグナルの異常と関連づけられています。細胞表面受容体であるLIFRは、サイトカイン—受容体間のクロストークや下流経路の配線を解明するうえでも扱いやすい標的（ノード）となります。

LIFR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LIFR 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LIFR内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LIFRの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LIFRが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。