LHX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403100-ACT

LHX1 (LIM homeobox 1) codifica um fator de transcrição com domínio LIM que coordena a especificação de linhagens e o padrão de tecidos durante a embriogênese, incluindo papéis no desenvolvimento neural, renal e do trato reprodutivo. Ao se ligar ao DNA por meio do seu homeobox e ao montar complexos transcricionais via interações LIM, o LHX1 regula programas que controlam decisões de destino celular, morfogênese e diferenciação. A expressão desregulada de LHX1 ou alterações na programação do desenvolvimento têm sido implicadas em anomalias congênitas e também foram observadas em estados transcricionais associados ao câncer, nos quais reguladores do desenvolvimento são reativados. Como um nó em redes regulatórias gênicas do desenvolvimento, o LHX1 é frequentemente estudado em diferenciação de células-tronco, modelos de organogênese e no controle transcricional da identidade tecidual.

LHX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LHX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LHX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LHX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LHX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LHX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LHX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LHX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LHX1 em células tumorais com expressão de LHX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.