LGR6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401443-ACT

ヒトLGR6は、ロイシンリッチリピートを含むGタンパク質共役受容体をコードしており、R-spondinに対する高親和性受容体として機能し、カノニカルなWnt/β-カテニンシグナル伝達を増強します。Wntによって駆動される転写プログラムを強めることで、LGR6は上皮性幹／前駆細胞の維持、組織恒常性、分化ダイナミクスの制御に寄与します。LGR6活性は、細胞周期制御、遊走、再生応答を司る経路とも交差しており、発生やリモデリングにおけるシグナル間クロストークを研究するうえで有用な結節点となります。LGR6–R-spondin–Wnt軸のシグナル異常は、がん遺伝子経路の活性化や幹細胞様状態の変化と関連づけられており、がん生物学および関連するシグナル表現型におけるLGR6の検討を支持します。

LGR6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LGR6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LGR6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LGR6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLGR6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LGR6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLGR6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLGR6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLGR6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLGR6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。