LGR5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400726-ACT

LGR5 (receptor acoplado à proteína G 5 contendo repetições ricas em leucina) é um receptor de sete domínios transmembrana que atua como marcador de células-tronco e progenitoras em múltiplos epitélios, incluindo as criptas intestinais e os folículos pilosos. Ele funciona como receptor de alta afinidade para R-spondinas e potencializa a sinalização canônica WNT/β-catenina ao estabilizar complexos receptores Frizzled/LRP, apoiando assim programas de autorrenovação, proliferação e regeneração tecidual. Por meio da modulação de redes transcricionais dirigidas por WNT, o LGR5 ajuda a regular trajetórias de diferenciação e interações com o nicho em tecidos em desenvolvimento e adultos. A expressão desregulada de LGR5 e a hiperativação da via WNT são frequentemente associadas à biologia tumoral e são utilizadas para investigar estados semelhantes aos de células-tronco cancerosas e a plasticidade de linhagem em sistemas modelo humanos.

LGR5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LGR5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LGR5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LGR5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LGR5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LGR5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LGR5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LGR5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LGR5 em células tumorais com expressão de LGR5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.