LEPROT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406321

概要

LEPROT（leptin receptor overlapping transcript、レプチン受容体オーバーラップ転写産物）は、endospanin-1 とも呼ばれるエンドソーム膜タンパク質で、サイトカイン受容体の輸送（トラフィッキング）や細胞表面での存在量を調節し、とりわけ LEPR（レプチン受容体）および関連するシグナル複合体に顕著な影響を及ぼします。受容体の内在化とリサイクリングを制御することで、LEPROT は JAK/STAT シグナル伝達における経路出力や、膜近傍でのより広範なシグナル伝達制御に影響し得ます。LEPROT の発現変化は、レプチン応答性やエネルギー恒常性への影響を介して、代謝表現型と関連づけられています。また、受容体のソーティング（選別）に関与することから、炎症関連シグナル伝達や、疾患状況における受容体ターンオーバー異常の研究においても重要です。

LEPROT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLEPROT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LEPROT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LEPROTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LEPROTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LEPROTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LEPROT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LEPROTの機能に不可欠なLEPROTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、LEPROTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LEPROT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLEPROT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LEPROT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LEPROT HDRプラスミド（h）および LEPROT HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLEPROTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLEPROT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。