LCRG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410137-ACT

GGNBP2 codifica a LCRG1, uma proteína nuclear implicada na regulação transcricional e no controle de programas de proliferação e diferenciação celular. Atividades descritas relacionam GGNBP2 a processos associados à cromatina e à modulação de redes de expressão gênica que influenciam a progressão do ciclo celular e a homeostase tecidual. Alterações na expressão de GGNBP2/LCRG1 foram observadas em estudos de biologia tumoral e transformação celular, sustentando seu uso como um regulador dependente do contexto em sinalizações relevantes para o câncer. Como alvo humano, LCRG1 oferece um recurso útil para dissecar o controle transcricional a montante, as assinaturas de expressão gênica a jusante e fenótipos relacionados a crescimento, migração e respostas ao estresse.

LCRG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GGNBP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LCRG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GGNBP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GGNBP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LCRG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GGNBP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LCRG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LCRG1 em células tumorais com expressão de GGNBP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.