Lck Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421397

Visão geral

A Lck (quinase de tirosina específica de linfócitos) é uma quinase da família Src que inicia a sinalização do receptor de célula T (TCR) ao fosforilar motivos ITAM do CD3 e promover o recrutamento e a ativação de ZAP70, levando à montagem, a jusante, do sinalossoma LAT/SLP-76. Em células imunes de camundongo, a Lck regula eventos de sinalização proximais que acoplam o reconhecimento de antígeno ao fluxo de cálcio, à ativação de MAPK e a programas transcricionais controlados por NFAT, NF-κB e AP-1, moldando o desenvolvimento de timócitos e a ativação de células T periféricas. A atividade da Lck é integrada à sinalização de correceptores (CD4/CD8) e é modulada por alternância dependente de fosforilação entre conformações ativas e inativas, o que a torna central para os limiares de sinalização em linfócitos. Vias dependentes de Lck desreguladas são frequentemente usadas como modelos de ativação imune alterada, linfoproliferação e sinalização aberrante de quinases de tirosina em contextos hematopoéticos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Lck (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Lck em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Lck, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Lck na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Lck.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Lck para a investigação da sinalização de Lck, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Lck críticos para a função Lck
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Lck para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Lck Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Lck Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Lck. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Lck Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Lck (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Lck para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Lck definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.