LASS6 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403901-NIC

CERS6 は、セラミド合成酵素 6（LASS6）をコードする遺伝子であり、小胞体に局在する酵素として C16-セラミドを優先的に産生します。セラミドは膜組成とシグナル伝達を制御する中心的な生理活性スフィンゴ脂質です。LASS6 はセラミド量を調節することでスフィンゴ脂質代謝に影響を与え、アポトーシス、オートファジー、小胞体ストレス応答、炎症性シグナル伝達を司る経路と交差します。CERS6 活性の変化は、脂質恒常性の破綻や、がん細胞の生存・遊走、代謝ストレス、神経炎症プロセスに関連する表現型と結び付けられています。セラミド—スフィンゴミエリン—糖脂質（グリコスフィンゴ脂質）の相互変換における結節点として、CERS6 は脂質リモデリングとオルガネラ機能、ならびにストレス適応プログラムを関連付けて理解するために広く研究されています。

LASS6 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CERS6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CERS6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CERS6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CERS6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。