Langerin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401949-ACT

CD207 codifica la Langerina, un recettore lectinico di tipo C arricchito nelle cellule di Langerhans e in subset correlati di cellule dendritiche, che svolge un ruolo nel riconoscimento dei patogeni e nella cattura dell’antigene a livello delle barriere epiteliali. La Langerina lega motivi carboidratici in modo dipendente da Ca²⁺ e media l’endocitosi nei granuli di Birbeck, plasmando i programmi di processamento e presentazione dell’antigene che influenzano l’innesco dell’immunità adattativa. Attraverso l’uptake guidato dalla lectina e lo smistamento verso compartimenti endosomiali, interseca i meccanismi di sensing dell’immunità innata e la segnalazione infiammatoria che modulano la produzione di citochine e la polarizzazione delle cellule T. Alterazioni dell’espressione di CD207/Langerina o della funzione delle cellule di Langerhans sono rilevanti negli studi sull’omeostasi immunitaria cutanea, sull’infiammazione allergica e sulle risposte immunitarie di barriera associate alle infezioni.

Langerin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD207 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Langerin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD207 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD207, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Langerin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD207 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Langerin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Langerin nelle cellule tumorali con espressione di CD207 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.