Laminin γ-3CRISPR激活质粒(h): sc-404181-ACT

LAMC3 编码层粘连蛋白 γ-3（laminin γ-3），它是细胞外基质中的一种糖蛋白亚基，可与 α 链和 β 链组装形成基底膜中的层粘连蛋白异源三聚体。层粘连蛋白 γ-3 通过协调由整合素（integrin）和肌营养不良糖蛋白（dystroglycan）介导的信号传导，并与黏着斑动力学及细胞骨架组织相衔接，从而参与调控细胞–基质黏附、细胞极性与细胞迁移。借助这些相互作用，LAMC3 影响组织结构、神经突起生长以及上皮屏障特性，将细胞外基质重塑与发育及稳态调控程序联系起来。层粘连蛋白组成改变与基底膜完整性受损，与神经发育表型、与侵袭相关的细胞行为，以及由基质驱动的分化状态变化等研究密切相关。

Laminin γ-3 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性LAMC3的表达。

Laminin γ-3 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的LAMC3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于LAMC3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Laminin γ-3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的LAMC3位点，并能够研究内源性位点上依赖于Laminin γ-3的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在LAMC3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Laminin γ-3通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。