Laminin β-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401105-ACT

LAMB1 codifica per la laminina β1, una subunità fondamentale di diversi eterotrimeri di laminina che costituiscono una componente strutturale e di segnalazione primaria delle membrane basali. La laminina β1 sostiene l’assemblaggio della matrice extracellulare, l’adesione cellulare, la polarità e la migrazione attraverso interazioni con le integrine e altri recettori della matrice, influenzando vie quali la segnalazione delle adesioni focali e il rimodellamento del citoscheletro. Modellando l’integrità della membrana basale e la comunicazione cellula–matrice, la laminina β1 contribuisce all’architettura tissutale in compartimenti epiteliali, vascolari e del sistema nervoso. Un’espressione deregolata di LAMB1 o un’alterata organizzazione della membrana basale sono spesso studiate nel contesto di difetti dello sviluppo, della biologia dell’invasione tumorale e delle metastasi, e di microambienti fibrotici o infiammatori.

Laminin β-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LAMB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Laminin β-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LAMB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LAMB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Laminin β-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LAMB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Laminin β-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Laminin β-1 nelle cellule tumorali con espressione di LAMB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.