Plásmido Doble Nickase (h) Laminin α-2: sc-401162-NIC

LAMA2 codifica la laminina α-2, una subunidad clave de los heterotrímeros laminina-211/221 que organizan las membranas basales y conectan la arquitectura de la matriz extracelular con receptores de la superficie celular, incluidas las integrinas y el distroglicano. A través de estas interacciones, la laminina α-2 favorece la adhesión, la migración y las señales de supervivencia, y contribuye a la integridad tisular en el músculo esquelético, el nervio periférico y otros entornos ricos en lámina basal. El ensamblaje de la matriz dependiente de LAMA2 influye en la organización del citoesqueleto y en las vías de mecanotransducción que regulan la estabilidad de las miofibras y la función de las células de Schwann. La alteración de LAMA2 se asocia estrechamente con la distrofia muscular congénita por deficiencia de merosina y fenotipos neuromusculares relacionados, lo que lo convierte en una diana relevante para estudiar mecanismos de enfermedad impulsados por la MEC.

Laminin α-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LAMA2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LAMA2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LAMA2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LAMA2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.