Lamin A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400039-ACT

LMNA は、V型中間径フィラメントタンパク質であるラミンAをコードしており、ラミンCと重合して核ラミナを形成し、核膜の完全性を維持します。ラミンAは、LINC複合体を介して核内骨格と細胞骨格を連結することで、クロマチン構造、ゲノム安定性、メカノトランスダクションを制御し、転写プログラムやDNA損傷応答に影響を与えます。さらに、核膜孔の機能、有糸分裂後の核再構築、ラミナ関連ドメイン（LAD）の配置などのプロセスにも組み込まれており、これらが総合的に細胞運命やストレスシグナル伝達を形作ります。LMNA の機能異常は、筋・脂肪・心臓組織に影響するラミノパチーと関連しており、早老様表現型、核形態異常、遺伝子発現変化における役割の観点からも頻繁に研究されています。

Lamin A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LMNAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Lamin A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LMNA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLMNA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Lamin Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLMNA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLamin A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLMNA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLamin A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。