L-type Ca⁺⁺ CP α1D CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401745

概要

CACNA1D は、膜の脱分極を Ca2+ 流入および下流の Ca2+ 依存性シグナル伝達へと結び付ける L 型電位依存性カルシウムチャネルのポア形成性 α1D サブユニット（CaV1.3）をコードしています。CaV1.3 は、カルシウム／カルモジュリン経路、キナーゼカスケード、ならびに活動依存的な遺伝子発現プログラムを制御する細胞質 Ca2+ ダイナミクスを形成することで、興奮—転写カップリングに寄与します。非興奮性細胞および興奮性細胞において、CACNA1D の活性はカルシウム恒常性の調節を通じて、細胞分化、分泌、電気生理学的特性に影響を及ぼします。CACNA1D の遺伝学的変化や制御異常は、異常な電気シグナル伝達および Ca2+ 依存性の転写制御を伴う疾患と関連付けられており、疾患関連の細胞モデルにおけるチャネル機能の機構研究を支持しています。

L-type Ca++ CP α1D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCACNA1D遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CACNA1D内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CACNA1Dのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、L-type Ca++ CP α1Dタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、L-type Ca++ CP α1Dシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CACNA1D欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• L-type Ca++ CP α1Dの機能に不可欠なCACNA1Dエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CACNA1Dゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• L-type Ca++ CP α1D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびL-type Ca++ CP α1D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CACNA1D遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  L-type Ca++ CP α1D HDRプラスミド（h）および L-type Ca++ CP α1D HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCACNA1Dホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCACNA1D標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。