L-ficolin Double Nickaseプラスミド (h2): sc-404837-NIC-2
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- L-ficolin Double Nickaseプラスミド (h2)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- L-ficolinダブルニカースプラスミド（h2）およびL-ficolinダブルニカースプラスミド（h22）は、FCN2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: L-ficolin 抗体 (FCN219): sc-130297
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
L-ficolin Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404837-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトFCN2はL-フィコリンをコードしており、L-フィコリンは主として肝臓で産生される可溶性のパターン認識レクチンで、微生物や自己の変化した糖鎖モチーフに結合し、MASPプロテアーゼをリクルートすることで補体のレクチン経路を開始し、C4/C2の活性化、オプソニン化、ならびに炎症性シグナル伝達を促進する。補体依存的なクリアランス、凝集、そして食細胞の動員・活性化を調節することを通じて、L-フィコリンは感染と無菌性炎症の接点における自然免疫の恒常性維持に寄与する。遺伝的多型やFCN2発現の制御異常は、感染症に対する感受性や炎症性表現型の変化と関連することが報告されており、補体活性、肝臓の急性期応答、宿主—病原体相互作用を結び付ける分子ノードとしての有用性を支持している。FCN2の遺伝子編集や摂動モデルは、関連する細胞系およびin vitro系において、レクチン補体活性化、糖鎖依存的認識、ならびに下流の免疫エフェクター経路の機序解析を可能にする。
L-ficolin ダブルニカースプラスミド（h2）は、human 細胞株における FCN2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FCN2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FCN2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FCN2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。