KV2.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409737

Übersicht

KCNB2 kodiert die spannungsabhängige Kaliumkanal‑Untereinheit KV2.2, einen verzögert gleichrichtenden Kanal, der die Repolarisation der Membran formt und neuronale Feuerungsmuster reguliert. KV2.2 trägt zur Kontrolle der Aktionspotenzialfrequenz, der Nachhyperpolarisation und der erregbarkeitsabhängigen Signalübertragung bei und verknüpft elektrische Aktivität mit Kalziumdynamiken und nachgeschalteten transkriptionellen Antworten. Im zentralen Nervensystem beeinflussen Kanäle der KV2‑Familie die synaptische Integration und die Erregbarkeit von Netzwerken; eine veränderte Kaliumkanalfunktion ist allgemein mit neurologischen Störungen sowie einer erhöhten Anfälligkeit für Anfälle und neuroentwicklungsbezogene Phänotypen assoziiert. Humanes KCNB2 ist daher ein nützliches Ziel, um ionenkanalabhängige Mechanismen zu untersuchen, die das Membranpotenzial mit der neuronalen Physiologie koppeln.

Das KV2.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCNB2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCNB2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCNB2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KV2.2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCNB2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KV2.2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCNB2-Exone abzielen, die für die KV2.2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCNB2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KV2.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KV2.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCNB2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KV2.2 HDR-Plasmid (h) und KV2.2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCNB2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCNB2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.