KV2.2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409737

Visão geral

KCNB2 codifica a subunidade do canal de potássio dependente de voltagem KV2.2, um canal retificador tardio que molda a repolarização da membrana e regula os padrões de disparo neuronal. O KV2.2 contribui para o controle da frequência dos potenciais de ação, da pós-hiperpolarização e da sinalização dependente da excitabilidade, conectando a atividade elétrica à dinâmica do cálcio e a respostas transcricionais subsequentes. No sistema nervoso central, os canais da família KV2 influenciam a integração sináptica e a excitabilidade de rede, e alterações na função de canais de potássio estão amplamente associadas a disfunção neurológica e à suscetibilidade a convulsões e a fenótipos do neurodesenvolvimento. Assim, o KCNB2 humano é um alvo útil para dissecar mecanismos dependentes de canais iônicos que acoplam o potencial de membrana à fisiologia neuronal.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO KV2.2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene KCNB2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do KCNB2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do KCNB2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína KV2.2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de KCNB2 para a investigação da sinalização de KV2.2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) KCNB2 críticos para a função KV2.2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos KCNB2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo KV2.2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo KV2.2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus KCNB2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo KV2.2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR KV2.2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia KCNB2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo KCNB2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.