Ku-86 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400549-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Ku-86O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Ku-86 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Ku-86 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para XRCC5. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Ku86 Anticorpo (B-1): sc-5280
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Ku-86 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400549-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ku-86 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400549-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
XRCC5 codifica Ku-86 (Ku80), uma subunidade central do heterodímero Ku que reconhece quebras de dupla fita no DNA e inicia a junção de extremidades não homólogas canônica (c-NHEJ). Ao se ligar às extremidades de DNA quebradas e recrutar a DNA-PKcs para formar o complexo DNA-PK, Ku-86 coordena o processamento das extremidades e a ligação (religação) para preservar a integridade do genoma durante o estresse replicativo e após agressões genotóxicas. A função de Ku-86 se conecta à recombinação V(D)J, à recombinação de troca de classe, à manutenção de telômeros e a checkpoints de sinalização de dano ao DNA. A desregulação do reparo dependente de XRCC5 tem sido associada a fenótipos de instabilidade genômica e a sensibilidade alterada a agentes que danificam o DNA, o que sustenta sua frequente investigação em biologia do câncer, imunologia e manutenção do genoma relacionada ao envelhecimento.
Ku-86 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus XRCC5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de XRCC5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função XRCC5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com XRCC5 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.