Plasmide Double Nickase (h) Ku-86: sc-400549-NIC

XRCC5 code Ku-86 (Ku80), une sous-unité centrale de l'hétérodimère Ku qui reconnaît les cassures double brin de l'ADN et initie la jonction d'extrémités non homologues canonique (c-NHEJ). En se liant aux extrémités d'ADN rompues et en recrutant DNA-PKcs pour former le complexe DNA-PK, Ku-86 coordonne le traitement des extrémités et la ligation afin de préserver l'intégrité du génome lors du stress réplicatif et après des agressions génotoxiques. La fonction de Ku-86 intervient aussi dans la recombinaison V(D)J, la recombinaison de commutation de classe, le maintien des télomères et les points de contrôle de la signalisation des dommages à l'ADN. La dérégulation des mécanismes de réparation dépendants de XRCC5 a été associée à des phénotypes d'instabilité génomique et à une sensibilité modifiée aux agents endommageant l'ADN, ce qui explique qu'il soit fréquemment étudié en biologie du cancer, en immunologie et dans le maintien du génome lié au vieillissement.

Ku-86 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus XRCC5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de XRCC5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de XRCC5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de XRCC5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.