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KMO慢病毒激活颗粒(h) | sc-418366-LAC | 200 µl | $455.00 |
人源 KMO(犬尿氨酸 3-单加氧酶)是一种黄素依赖性的线粒体酶,催化 L-犬尿氨酸羟化生成 3-羟基犬尿氨酸,是色氨酸–犬尿氨酸通路中的关键分支点。通过调控代谢通量流向喹啉酸以及 NAD⁺ 生物合成中间体等下游代谢物,KMO 有助于塑造细胞的氧化还原平衡、线粒体功能和炎症信号传导。KMO 活性异常与在神经炎症、神经退行性变、免疫介导性疾病以及癌症相关代谢重编程中观察到的犬尿氨酸代谢物谱失衡有关。因此,调控 KMO 表达可用于解析代谢–免疫串扰以及该通路依赖性的细胞命运与应激反应效应。
KMO 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 KMO 表达。
KMO 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在KMO转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性KMO表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 KMO 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。