Plasmide CRISPR/Cas9 KO KLK12 (h): sc-407376

Présentation

KLK12 code la peptidase 12 apparentée aux kallikréines, une protéase à sérine sécrétée qui contribue au remodelage de la matrice extracellulaire et à la protéolyse péricellulaire. En clivant des substrats peptidiques et en influençant l’activité des cascades protéolytiques, KLK12 peut moduler les interactions cellule–matrice, l’homéostasie tissulaire et des événements de signalisation liés à la migration et aux réponses angiogéniques. Une expression altérée de KLK12 a été rapportée dans de multiples pathologies humaines, notamment des cancers, où des modifications de l’équilibre protéolytique peuvent affecter des processus du microenvironnement associés à l’invasion. En tant que protéase soluble à activité dépendante du contexte, KLK12 est souvent étudiée dans des modèles de biologie tumorale, de régulation vasculaire et de remodelage tissulaire lié à l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KLK12 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KLK12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KLK12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KLK12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KLK12.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KLK12 pour l'étude de la signalisation de KLK12, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KLK12 essentiels à la fonction de KLK12
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KLK12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KLK12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KLK12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KLK12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KLK12 plasmide HDR (h) et le KLK12 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KLK12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KLK12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.