KLF3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402926-ACT

KLF3 (fator semelhante a Krüppel 3) é um fator de transcrição do tipo “zinc-finger” que se liga a elementos regulatórios ricos em GC para coordenar programas de expressão gênica que controlam a maturação eritroide, a adipogênese e decisões mais amplas de linhagem hematopoética. Ao atuar em grande parte como um repressor transcricional dependente do contexto por meio de interações com complexos de correpuladores, o KLF3 modula o estado da cromatina e influencia a produção transcricional dependente da RNA polimerase II. Redes associadas ao KLF3 se cruzam com vias regulatórias metabólicas e imunológicas, incluindo módulos de genes relacionados à membrana do eritrócito e à globina, bem como circuitos transcricionais inflamatórios. A atividade desregulada do KLF3 tem sido associada a estados de diferenciação alterados e à reprogramação transcricional observada em pesquisas sobre doenças hematológicas e metabólicas, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de identidade celular e circuitos de regulação gênica.

KLF3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KLF3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KLF3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KLF3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KLF3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KLF3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KLF3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KLF3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KLF3 em células tumorais com expressão de KLF3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.