KIR3.1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404965-ACT

KCNJ3 codifica a subunidade humana do canal de potássio retificador para dentro KIR3.1 (GIRK1), um componente central dos canais Kir (GIRK) regulados por proteínas G, que fazem a ligação entre a sinalização de GPCRs e a hiperpolarização da membrana. Ao formar canais heterotetraméricos com outras subunidades GIRK, a KIR3.1 ajuda a regular a excitabilidade neuronal, a atividade marcapasso e a neurotransmissão inibitória por meio do controle da condutância de potássio. Esse eixo de canal iônico integra-se à sinalização dependente de cAMP/PKA e ao manejo de cálcio a jusante para moldar padrões de disparo e a responsividade sináptica. Alterações na expressão de KCNJ3 ou na atividade dos canais GIRK têm sido associadas a fenótipos relacionados à eletrofisiologia e são frequentemente investigadas no contexto da regulação neurológica e do ritmo cardíaco, bem como em modelos celulares de excitabilidade e transdução de sinal.

KIR3.1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCNJ3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KIR3.1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCNJ3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCNJ3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KIR3.1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCNJ3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KIR3.1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KIR3.1 em células tumorais com expressão de KCNJ3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.