KIF17 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403046-ACT

KIF17（キネシンファミリー17）は、極性をもつ細胞における細胞内輸送を担う、微小管のプラス端方向へ移動するモータータンパク質をコードします。特に、ニューロンでのカーゴ輸送や一次繊毛の区画化において重要な役割を果たします。KIF17はATP依存的な運動性を微小管ダイナミクスと連動させることで、樹状突起内輸送、シナプス機能、繊毛関連シグナル伝達経路の調節などのプロセスに関与します。KIF17の発現量や局在の変化は、神経発生・神経変性に関連する表現型の文脈に加え、繊毛病（ciliopathy）に関連する輸送・シグナル伝達異常との関連でも研究されています。これらの特徴により、KIF17は微小管依存的輸送、神経細胞生物学、ならびに繊毛に結び付いた制御ネットワークを解析するための有用な標的となります。

KIF17 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KIF17の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KIF17 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KIF17 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKIF17転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KIF17の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKIF17遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKIF17依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKIF17発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKIF17経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。