Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
KIBRA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402677
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- KIBRA El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico KIBRA, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: KIBRA Anticuerpo (B-3): sc-518263
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
KIBRA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402677 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
WWC1 codifica KIBRA, una proteína andamiaje con dominios WW enriquecida en cerebro y riñón que coordina interacciones proteína–proteína mediante sus dominios WW y C2. KIBRA participa en la regulación de la vía Hippo a través de interacciones con las quinasas LATS y componentes relacionados, conectando la polaridad celular, la inhibición por contacto y el control transcripcional de la proliferación y la apoptosis. También se relaciona con vías de tráfico de membrana y remodelación del citoesqueleto, apoyando procesos como la endocitosis y la migración dirigida. La desregulación de la señalización de WWC1/KIBRA se ha asociado con alteraciones en la plasticidad sináptica y se ha investigado en el contexto del control del crecimiento relevante para el cáncer y la neurobiología.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO KIBRA (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen WWC1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del WWC1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de WWC1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KIBRA.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en WWC1 para la investigación de la señalización de KIBRA, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de WWC1 críticos para la función de KIBRA
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de WWC1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido KIBRA CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KIBRA CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus WWC1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KIBRA (h) y el plásmido HDR KIBRA (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología WWC1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana WWC1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.